Plasmide Double Nickase (h) RNF31: sc-412436-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RNF31 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RNF31 Double Nickase (h) et le plasmide RNF31 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF31. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RNF31 | sc-412436-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RNF31 | sc-412436-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF31 code une ligase E3 de l’ubiquitine qui constitue le cœur catalytique du complexe d’assemblage des chaînes d’ubiquitine linéaires (LUBAC), générant des chaînes d’ubiquitine liées en Met1 qui modulent la transduction du signal. En régulant NF-κB et les voies de l’immunité innée, RNF31 contribue au contrôle de l’expression des gènes inflammatoires, de la résistance à l’apoptose et des réponses au stress cellulaire. Son activité influe sur le remodelage, dépendant de l’ubiquitine, des complexes de signalisation en aval de récepteurs tels que TNFR et des récepteurs de reconnaissance des motifs. Un dysfonctionnement de RNF31/LUBAC a été associé à une altération de l’homéostasie immunitaire et à des contextes de signalisation oncogénique, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur le contrôle des voies dépendant de l’ubiquitination.
RNF31 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF31 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF31. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF31. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF31.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.