Plasmide Double Nickase (h) RNF25: sc-408040-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RNF25 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RNF25 Double Nickase (h) et le plasmide RNF25 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF25. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RNF25 Antibody (E-10): sc-398749
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RNF25 | sc-408040-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RNF25 | sc-408040-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF25 code une ligase E3 ubiquitine-protéine contenant un domaine « RING finger », qui contribue à réguler la stabilité des protéines et la signalisation en catalysant le transfert d’ubiquitine vers des substrats spécifiques. En contrôlant, de manière dépendante de l’ubiquitine, le renouvellement des protéines et la composition des complexes de signalisation, RNF25 peut influencer des voies liées aux réponses immunitaires innées et inflammatoires, notamment via la modulation de programmes transcriptionnels associés à NF-κB. En tant que composant du système cellulaire ubiquitine–protéasome, RNF25 participe à la protéostasie et à l’arrêt des signaux, des processus fréquemment perturbés en oncologie et lors de dysrégulations immunitaires. Une expression ou une activité altérée de ligases de l’ubiquitine telles que RNF25 est donc pertinente pour l’étude de la signalisation de stress, de la transcription induite par les cytokines et des interactions entre voies de signalisation dans les cellules humaines.
RNF25 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF25 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF25. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF25. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF25.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.