RNF185 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416413

概要

RNF185は、ミトコンドリア外膜に局在するRING型E3ユビキチンリガーゼをコードしており、特定の基質へのユビキチン転移を触媒することでタンパク質品質管理に寄与します。ユビキチン依存的な分解（ターンオーバー）やシグナル伝達を介して、RNF185はミトコンドリアの恒常性維持、マイトファジー関連過程、ならびにミトコンドリア機能と自然免疫シグナルのクロストークの調節に関与すると報告されています。オートファジーおよび炎症経路との相互作用が示されていることから、オルガネラ損傷が下流の転写プログラムへと結び付くストレス応答の研究において、その重要性が支持されています。RNF185活性の変化は、ミトコンドリア機能不全やプロテオスタシスの破綻が関与する文脈、例えば神経炎症やがんに伴う代謝リモデリングなどで検討されています。

RNF185 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRNF185遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RNF185内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RNF185のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RNF185タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RNF185シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RNF185欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RNF185の機能に不可欠なRNF185エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RNF185ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RNF185 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRNF185 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RNF185遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RNF185 HDRプラスミド（h）および RNF185 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRNF185ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRNF185標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。