Plasmide Double Nickase (h) RNF170: sc-410169-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RNF170 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RNF170 Double Nickase (h) et le plasmide RNF170 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF170. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RNF170 | sc-410169-NIC | 20 µg | $410.00 |
RNF170 code une ligase E3 à doigt RING de l’ubiquitine résidente du réticulum endoplasmique, qui soutient le contrôle qualité des protéines en favorisant l’ubiquitination et la dégradation par le protéasome de certains substrats associés aux membranes. Via la dégradation associée au RE (ERAD) et une signalisation dépendante de l’ubiquitine, RNF170 contribue à la protéostasie et peut influencer des voies liées au calcium et aux réponses au stress associées à la fonction du RE. Une activité altérée de RNF170 a été associée à une dérégulation de la signalisation de l’ubiquitine et a été étudiée dans le contexte de la neurodégénérescence et d’autres troubles où l’homéostasie du RE est perturbée. Par conséquent, RNF170 constitue une cible utile pour explorer la spécificité des ligases d’ubiquitine, les réponses au stress du RE et les réseaux de signalisation en aval dans les cellules humaines.
RNF170 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF170 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF170. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF170. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF170.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.