RNF149 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406588

Visão geral

RNF149 codifica uma proteína contendo um domínio RING finger, prevista atuar como uma ligase E3 de ubiquitina, sustentando o controle dependente de ubiquitina da estabilidade proteica e da dinâmica de sinalização. As ligases E3 do tipo RING ajudam a regular a proteostase, as respostas ao estresse e a degradação de componentes de vias que moldam a progressão do ciclo celular e decisões de sobrevivência. Assim, RNF149 é relevante para dissecar como a ubiquitinação e a degradação proteassomal coordenam a homeostase celular e a transdução de sinais. Alterações na regulação da via da ubiquitina são frequentemente associadas à biologia tumoral e a outros distúrbios ligados ao controle de qualidade de proteínas, tornando RNF149 um alvo útil para estudos mecanísticos em modelos relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RNF149 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RNF149 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RNF149, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RNF149 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RNF149.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RNF149 para a investigação da sinalização de RNF149, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RNF149 críticos para a função RNF149
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RNF149 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo RNF149 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RNF149 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RNF149. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo RNF149 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RNF149 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RNF149 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RNF149 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.