RNF149 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406588

概要

RNF149は、E3ユビキチンリガーゼとして機能すると予測されるRINGフィンガー含有タンパク質をコードしており、ユビキチン依存的なタンパク質安定性の制御やシグナル伝達ダイナミクスの調節に関与すると考えられます。RING型E3リガーゼは、プロテオスタシス、ストレス応答、ならびに細胞周期の進行や生存／死の決定を形作る経路構成因子のターンオーバーの制御に寄与します。したがってRNF149は、ユビキチン化とプロテアソーム分解がどのように協調して細胞恒常性とシグナル伝達を統合的に制御するのかを解明するうえで重要です。ユビキチン経路の制御異常は、腫瘍生物学をはじめ、タンパク質品質管理に関連するさまざまな疾患としばしば結び付けられているため、RNF149は疾患関連モデルにおける機序解析の有用な標的となります。

RNF149 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRNF149遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RNF149内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RNF149のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RNF149タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RNF149シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RNF149欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RNF149の機能に不可欠なRNF149エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RNF149ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RNF149 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRNF149 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RNF149遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RNF149 HDRプラスミド（h）および RNF149 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRNF149ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRNF149標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。