RNase H1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422686

概要

マウスRnaseh1はRNase H1をコードしており、RNase H1は構造特異的エンドヌクレアーゼとしてRNA:DNAハイブリッド中のRNA鎖を分解し、複製および転写の過程で生じるRループを解消します。岡崎フラグメント中間体を処理し、持続的なRループ形成を抑制することで、RNase H1はミトコンドリアおよび核ゲノムの安定性、複製フォークの進行、ならびに転写の恒常性を支えます。RNA:DNAハイブリッド代謝の異常は、複製ストレス、DNA損傷シグナル伝達、ミトコンドリア機能不全と関連しているため、Rnaseh1はゲノム維持経路を研究するうえで有用な結節点となります。したがってRnaseh1の撹乱は、哺乳類細胞における核酸代謝、ミトコンドリア生物学、ストレス応答表現型の機構解析に関連します。

RNase H1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRnaseh1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rnaseh1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rnaseh1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RNase H1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RNase H1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rnaseh1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RNase H1の機能に不可欠なRnaseh1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rnaseh1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RNase H1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRNase H1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rnaseh1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RNase H1 HDRプラスミド（m）および RNase H1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRnaseh1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRnaseh1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。