Plasmide CRISPR d'Activation (h) RN-tre: sc-411321-ACT

USP6NL (RN-tre) code une protéine activatrice de la GTPase Rab impliquée dans la régulation du trafic endocytaire et du recyclage des récepteurs, reliant le transport membranaire à la dynamique de signalisation des récepteurs aux facteurs de croissance. En modulant la maturation et le tri des vésicules dépendants des Rab, RN-tre peut influencer le contrôle spatio-temporel de voies telles que la signalisation EGFR/MAPK et le remodelage du cytosquelette, qui gouvernent la migration et l’invasion cellulaires. Une expression altérée d’USP6NL a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et le gène est étudié comme un déterminant des programmes de trafic des récepteurs qui remodèlent les phénotypes de prolifération et de motilité. En tant que régulateur du trafic intracellulaire chez l’humain, il est également pertinent pour analyser comment le transport membranaire s’articule avec la transduction du signal, le renouvellement des adhésions et les réponses au stress cellulaire.

RN-tre Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de USP6NL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RN-tre Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus USP6NL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription USP6NL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RN-tre. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus USP6NL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RN-tre au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RN-tre dans les cellules tumorales présentant une expression de USP6NL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.