RIP140 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401787-ACT

NRIP1はRIP140をコードする遺伝子であり、核内受容体やその他のDNA結合型転写因子と相互作用することで遺伝子発現を調節し、代謝および内分泌プログラムの協調を担う転写コレギュレーターである。RIP140は、標的プロモーターにおけるクロマチン依存的な活性化または抑制を形成することで、脂肪細胞分化、ミトコンドリア機能、脂質・グルコース恒常性、炎症性シグナル伝達に影響を及ぼす。エストロゲン受容体シグナル、PPAR依存性転写、さらに広範なコアクチベーター／コリプレッサーネットワークなどの経路とのクロストークを通じて、RIP140は栄養シグナルを細胞分化やストレス応答と統合するのに寄与する。NRIP1/RIP140活性の破綻は、文献上、代謝機能障害、生殖関連の表現型、ならびに複数の疾患関連状況で観察される転写状態の変化と関連づけられており、機序解明研究における利用を支持する知見となっている。

RIP140 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NRIP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RIP140 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NRIP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNRIP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RIP140の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNRIP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRIP140依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNRIP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRIP140経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。