Plasmide Double Nickase (m) RIP: sc-422681-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) RIP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RIP Double Nickase (m) et le plasmide RIP Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ripk1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RIP Antibody (C-12): sc-133102
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) RIP | sc-422681-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) RIP | sc-422681-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Ripk1 code la kinase 1 sérine/thréonine à interaction avec le récepteur (RIPK1), un régulateur central de la signalisation des récepteurs du TNF et des récepteurs de reconnaissance de motifs, qui coordonne l’expression des gènes inflammatoires et les décisions de destinée cellulaire. Les activités d’échafaudage et de kinase de RIPK1 ajustent l’équilibre entre les programmes de survie pilotés par NF-κB/MAPK et les voies de mort cellulaire régulée, notamment l’apoptose et la nécroptose via la signalisation RIPK3–MLKL. Par l’intermédiaire de ces nœuds, RIPK1 contribue à l’homéostasie de l’immunité innée, aux réponses aux cytokines et à la signalisation de stress dans divers types cellulaires. Une dérégulation de la signalisation de RIPK1 a été impliquée dans des pathologies inflammatoires et des mécanismes associés à la neurodégénérescence, faisant de Ripk1 un locus fréquemment étudié dans les travaux sur les voies de signalisation pertinentes pour les maladies.
RIP Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ripk1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ripk1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ripk1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ripk1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.