Plásmido Doble Nickase (h) Ribosomal Protein L22: sc-417644-NIC

RPL22 codifica la proteína ribosomal humana L22, un componente estructural de la subunidad ribosomal grande 60S que ayuda a coordinar la arquitectura del ARNr y favorece una traducción eficiente. Más allá de su función central en la biogénesis ribosomal y la síntesis de proteínas, RPL22 se ha vinculado con la regulación del procesamiento del ARNm y con respuestas celulares al estrés que se cruzan con programas de proliferación y diferenciación. Las alteraciones en la dosis o en la función de proteínas ribosomales pueden desestabilizar el control translacional y la homeostasis nucleolar, procesos que se estudian con frecuencia en el contexto de la biología del cáncer y las ribosomopatías. Por ello, RPL22 se investiga habitualmente por su contribución a la proteostasis, la regulación del ciclo celular y las vulnerabilidades dependientes del contexto que surgen cuando se altera la función ribosomal.

Ribosomal Protein L22 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RPL22 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RPL22. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RPL22. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RPL22 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.