RHBDL6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404212

Visão geral

RHBDF2 codifica a RHBDL6, uma protease de serina intramembranar da família das romboides que se localiza em endomembranas e contribui para a proteólise regulada de substratos associados à membrana. A atividade de RHBDL6 tem sido associada ao controlo de qualidade proteico, ao tráfego intracelular e à degradação de componentes de sinalização, integrando-se com a degradação associada ao retículo endoplasmático (ERAD) e com programas adaptativos ao stress que moldam a proteostase celular. Por estes mecanismos, a RHBDL6 pode influenciar os outputs de sinalização de fatores de crescimento e inflamatórios, incluindo vias ligadas à disponibilidade de ligandos de EGFR e à modulação da imunidade inata. A desregulação do processamento mediado por proteases romboides tem sido associada a remodelação patológica de redes de sinalização em biologia do cancro e em modelos de doenças inflamatórias, sustentando a investigação da proteólise dependente de RHBDL6 em contextos relevantes para a doença.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RHBDL6 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RHBDF2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RHBDF2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RHBDF2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RHBDL6.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RHBDF2 para a investigação da sinalização de RHBDL6, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RHBDF2 críticos para a função RHBDL6
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RHBDF2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo RHBDL6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RHBDL6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RHBDF2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo RHBDL6 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RHBDL6 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RHBDF2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RHBDF2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.