RHAMM CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402431-ACT

HMMR kodiert RHAMM (hyaluronanvermittelter Motilitätsrezeptor), ein multifunktionales Protein, das Hyaluronan bindet und mit Regulatoren des Zytoskeletts interagiert, um Zellbeweglichkeit, Polarität und extrazellulärmatrixgetriebene Signalübertragung zu koordinieren. RHAMM ist an der Zelloberfläche, im Zytoplasma und an der mitotischen Spindel lokalisiert, wo es zur Mikrotubuli-Dynamik, zur Zentrosomenfunktion und zum Ablauf der Mitose beiträgt, unter anderem über ERK/MAPK-Signalwege und die Kontrolle des Spindelaufbaus. Eine dysregulierte HMMR-Expression wurde mit veränderten Migrations- und Proliferationsphänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext von Tumorzellinvasion, metastaseassoziierten Programmen und aberranter Zellzyklusregulation untersucht. Daher dient RHAMM als hilfreicher Knotenpunkt, um Hyaluronan–ECM-Signalwege, zytoskelettales Remodeling und mitoseassoziierte Stressantworten in humanen Zellmodellen zu analysieren.

RHAMM Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HMMR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

RHAMM Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HMMR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HMMR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RHAMM-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HMMR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RHAMM-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RHAMM-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HMMR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.