RFRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406767

概要

NPVFはRFamide関連ペプチド前駆体をコードしており、これが加工されてRFRPニューロペプチドが産生される。RFRPはNPFF受容体の内因性リガンドとして作用し、神経内分泌シグナル伝達を調節する。ヒトでは、RFRPはゴナドトロピン放出の視床下部による制御や生殖軸のタイミング調節に関与し、GnRHニューロンの活動および下垂体からのLH/FSH分泌に影響を与える手がかりを統合する。この経路は、ストレス応答性、エネルギーバランス、概日リズムに関連した生殖生理に影響する、より広範なGPCR介在性の神経調節ネットワークとも連関している。NPVF/RFRPシグナルの変化は、生殖関連疾患や神経内分泌の恒常性破綻の文脈で検討されており、ペプチドのプロセシング、分泌、受容体シグナル伝達の機構研究を後押ししている。

RFRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNPVF遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NPVF内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NPVFのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RFRPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RFRPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NPVF欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RFRPの機能に不可欠なNPVFエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NPVFゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RFRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRFRP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NPVF遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RFRP HDRプラスミド（h）および RFRP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNPVFホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNPVF標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。