Plasmide CRISPR/Cas9 KO RESP18 (m): sc-422652

Présentation

Resp18 code RESP18, une protéine associée aux granules de sécrétion neuroendocriniens, enrichie dans les cellules des îlots pancréatiques ainsi que dans d’autres tissus à sécrétion régulée. RESP18 est impliquée dans la biogenèse des granules de sécrétion et le tri de leur cargaison, en soutenant la libération hormonale dépendante d’un stimulus et le maintien du contenu des granules. Par son lien avec l’exocytose régulée et l’homéostasie des cellules endocrines, Resp18 constitue un point d’entrée moléculaire pour étudier les voies qui contrôlent la maturation des granules d’insuline et la dynamique de leur sécrétion. Des altérations de l’organisation des granules ou des phénotypes de sécrétion hormonale observés dans des modèles expérimentaux font de Resp18 une cible pertinente pour la recherche sur les dysfonctionnements métaboliques et endocriniens.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RESP18 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Resp18 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Resp18, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Resp18 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RESP18.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Resp18 pour l'étude de la signalisation de RESP18, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Resp18 essentiels à la fonction de RESP18
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Resp18 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RESP18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RESP18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Resp18. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RESP18 plasmide HDR (m) et le RESP18 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Resp18 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Resp18 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.