Plásmido CRISPR de Activación (m) RELA/NFκB p65: sc-422642-ACT

Rela codifica la subunidad RELA/NFκB p65, un regulador transcripcional central de la señalización canónica de NF-κB que controla programas génicos inducibles implicados en la inflamación, la inmunidad innata y adaptativa, la supervivencia celular y las respuestas al estrés. En células de ratón, p65 forma dímeros funcionales, comúnmente con NFKB1/p50, y se transloca al núcleo tras la degradación de los inhibidores IκB mediada por IKK, integrando señales de TNF, IL‑1, los TLR, los receptores de antígeno y las vías de daño del ADN. La transcripción dependiente de RELA modula citocinas, quimiocinas, moléculas de adhesión y factores antiapoptóticos, configurando la activación de macrófagos, la función de los linfocitos y la homeostasis tisular. La actividad desregulada de NF‑κB/RELA se asocia con estados inflamatorios crónicos, autoinmunidad y redes de señalización oncogénica, por lo que Rela es un objetivo frecuente en estudios mecanísticos de la regulación inmunitaria y de la transcripción adaptativa al estrés.

RELA/NFκB p65 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Rela sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RELA/NFκB p65 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Rela en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Rela, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RELA/NFκB p65. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Rela y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RELA/NFκB p65 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RELA/NFκB p65 en células tumorales con expresión de Rela silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.