Plasmide CRISPR d'Activation (h) Reg IV: sc-404117-ACT

Le gène humain **REG4** code la protéine **regenerating islet-derived protein 4** (Reg IV), un membre sécrété de la famille des lectines de type C, impliqué dans la différenciation des cellules épithéliales, la défense des muqueuses et le remodelage tissulaire dans le tractus gastro-intestinal. L’expression de Reg IV est associée à la modulation de programmes de prolifération et de survie, avec des liens rapportés avec les voies de signalisation EGFR/ERK et PI3K/AKT dans des contextes épithéliaux. Cette protéine est fréquemment étudiée comme un facteur de type biomarqueur en biologie du système digestif et est associée à des processus pathologiques accompagnant le stress épithélial, l’inflammation et le remodelage lié aux tumeurs. Ces caractéristiques font de **REG4** une cible utile pour étudier la régulation transcriptionnelle, les réseaux de signalisation des facteurs sécrétés et des phénotypes épithéliaux pertinents pour les maladies.

Reg IV Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de REG4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Reg IV Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus REG4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription REG4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Reg IV. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus REG4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Reg IV au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Reg IV dans les cellules tumorales présentant une expression de REG4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.