REEP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407088

Visão geral

REEP1 (proteína 1 potenciadora da expressão do receptor) é uma proteína de membrana residente no retículo endoplasmático (RE) que ajuda a moldar a arquitetura tubular do RE e dá suporte ao tráfego de membranas, incluindo interações com processos associados a microtúbulos em neurônios. Ela contribui para a dinâmica do RE, para a comunicação entre RE e mitocôndrias e para a manutenção de axônios longos, nos quais a organização de membranas e a distribuição de organelas estão estreitamente acopladas à homeostase celular. Disfunções de REEP1 têm sido associadas a fenótipos neurodegenerativos hereditários, sobretudo à paraplegia espástica hereditária autossômica dominante (SPG31), e são estudadas no contexto de axonopatia e vulnerabilidade de neurônios motores. Modelos experimentais comumente investigam alterações dependentes de REEP1 na morfologia do RE, na distribuição mitocondrial e em vias de sinalização de estresse, como a resposta a proteínas mal dobradas (unfolded protein response).

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO REEP1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene REEP1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do REEP1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do REEP1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína REEP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de REEP1 para a investigação da sinalização de REEP1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) REEP1 críticos para a função REEP1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos REEP1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo REEP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo REEP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus REEP1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo REEP1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR REEP1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia REEP1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo REEP1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.