RBM47 Double Nickase Plasmid (m): sc-434185-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RBM47 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RBM47 Double-Nickase-Plasmid (m) und RBM47 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Rbm47 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RBM47 Double Nickase Plasmid (m) | sc-434185-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RBM47 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-434185-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Rbm47 kodiert das RNA-Bindemotiv-Protein RBM47, einen konservierten Regulator der posttranskriptionellen Genexpression, der an spezifische Transkripte bindet und so mRNA-Stabilität, -Lokalisierung und alternatives Spleißen beeinflusst. In Mauszellen trägt RBM47 zu RNA-Verarbeitungsprogrammen bei, die die epitheliale Differenzierung und stressresponsive transkriptionelle Outputs prägen, und ist dabei in breitere Wege des RNA-Metabolismus eingebunden, zu denen auch spleißosomenassoziierte Faktoren und die RNA-Überwachung gehören. Eine veränderte RBM47-Aktivität wurde mit fehlregulierten Genexpressionsnetzwerken in Verbindung gebracht, die für Entwicklung und epithelial-mesenchymale Plastizität relevant sind, was RBM47 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Mechanismen macht, die RNA-Regulation mit Zellzustandsübergängen verknüpfen. Diese Eigenschaften machen RBM47 zu einem relevanten Ziel, um zu untersuchen, wie RNA-bindende Proteine das Remodeling des Transkriptoms in der normalen Physiologie und in krankheitsrelevanten Kontexten koordinieren.
RBM47 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Rbm47-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Rbm47 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Rbm47-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Rbm47-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.