RBM10 Double Nickaseプラスミド (h): sc-418527-NIC

RBM10（RNA binding motif protein 10）は主として核内に局在するRNA結合因子で、スプライソソーム構成要素や配列特異的なRNAモチーフとの相互作用を介して、pre-mRNAスプライシング、選択的エクソン利用、RNAプロセシングを制御します。転写産物アイソフォームの産生を方向づけることで、RBM10は細胞周期制御、アポトーシス、分化に関連する遺伝子発現プログラムに影響を与え、Notch関連のスプライシング選択などシグナル伝達に関わるネットワークにも関与すると示唆されています。RBM10の活性や発現が破綻すると、複数のがんの文脈で観察されるスプライシング景観の変化と関連し、アイソフォームスイッチングが増殖やストレス応答経路に影響し得ます。これらの特性により、RBM10はヒト細胞におけるスプライシング制御機構やトランスクリプトーム再構築を解明するための有用な標的となります。

RBM10 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RBM10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RBM10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RBM10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RBM10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。