RasGRP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (bovine): sc-437322

概要

RasGRP1（RAS guanyl-releasing protein 1）は、ジアシルグリセロール（DAG）およびCa²⁺に応答するRasグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）であり、受容体刺激によって駆動されるホスホリパーゼC（PLC）シグナル伝達を、RasファミリーGTPアーゼの活性化へと結び付けます。Ras上でGDPからGTPへの交換を促進することで、RasGRP1はMAPK/ERKシグナル伝達の伝播を助け、PI3K経路の動態とも交差しながら、細胞の活性化、増殖、分化プログラムを形作ります。免疫系の細胞系列においては、RasGRP1は抗原受容体シグナル伝達の主要なメディエーターであり、下流の転写応答に必要な閾値設定にも寄与します。RasGRP1シグナルが破綻すると、免疫恒常性の変化や、Ras経路の制御が乱れた腫瘍性シグナル環境との関連が報告されており、シグナル伝達機構や細胞運命制御の機序研究において重要な標的となります。

RasGRP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（bovine）は、bovine細胞株における遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RasGRP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RasGRP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RasGRP1の機能に不可欠なエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RasGRP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（bovine）およびRasGRP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（bovine2）によってコードされるgRNAは、遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RasGRP1 HDRプラスミド（bovine）および RasGRP1 HDRプラスミド（bovine2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定の標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。