Ras-GRF2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404141

概要

RASGRF2は、カルシウムおよびリン脂質によって制御されるグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）であるRas-GRF2をコードしており、Rasおよび関連する低分子GTPアーゼを活性化することでMAPK/ERKシグナル伝達の動態を制御します。Ras-GRF2は、神経活動や受容体を介したシグナル入力を統合し、下流のキナーゼやRhoファミリー経路を通じて、シナプス可塑性、神経突起伸長、細胞骨格リモデリングに影響を及ぼします。さらに、Ras依存的な転写プログラムを調節することにより、RASGRF2は文脈依存的に細胞増殖や分化状態に影響します。Ras-GRF2が関与するRas経路の結合（カップリング）の破綻は、GTPアーゼ活性化の変化が増殖・生存応答を作り替え得ることから、神経生物学およびがん関連シグナルのモデルにおいて検討されています。

Ras-GRF2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRASGRF2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RASGRF2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RASGRF2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ras-GRF2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ras-GRF2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RASGRF2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ras-GRF2の機能に不可欠なRASGRF2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RASGRF2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ras-GRF2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRas-GRF2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RASGRF2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ras-GRF2 HDRプラスミド（h）および Ras-GRF2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRASGRF2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRASGRF2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。