rapsyn CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422599

概要

Rapsn は、神経筋接合部においてニコチン性アセチルコリン受容体（AChR）を固定・クラスター化するシナプス後部の足場タンパク質ラプシン（rapsyn）をコードし、シナプスの成熟と維持を調整します。AChR サブユニットや細胞骨格成分との相互作用を介して、rapsyn は受容体の安定化、終板（エンドプレート）の構造化、ならびに効率的な神経筋伝達を支えます。Rapsn 依存的なクラスター形成が破綻すると、運動終板におけるシナプス構築とシグナル伝達が乱れ、この経路が神経筋接合部の機能不全と関連することが示されます。そのため、マウスの Rapsn は、骨格筋におけるシナプス形成、受容体輸送、シナプス安定性を制御する機構をモデル化する目的で広く用いられています。

rapsyn CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRapsn遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rapsn内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rapsnのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、rapsynタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、rapsynシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rapsn欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• rapsynの機能に不可欠なRapsnエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rapsnゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• rapsyn CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびrapsyn CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rapsn遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  rapsyn HDRプラスミド（m）および rapsyn HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRapsnホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRapsn標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。