RAP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401709

概要

TERF2IPはRAP1をコードしており、RAP1はシェルテリン複合体の中核を成す構成要素の一つである。RAP1はテロメアリピート結合因子2（TRF2）と結合して、染色体末端が不適切なDNA損傷シグナルの活性化や末端同士の融合（エンド・ツー・エンド融合）を起こさないよう保護する。テロメア末端の保護にとどまらず、RAP1はテロメア長の恒常性維持、テロメアにおける複製ストレス応答、さらにDNA修復およびチェックポイント経路の協調を通じて、より広範なゲノム安定性にも寄与する。RAP1はテロメア以外の部位での転写制御にも関与するとされ、テロメア生物学をクロマチンや遺伝子発現プログラムと結び付ける役割が示唆されている。TERF2IP/RAP1機能の破綻は、テロメア機能不全に伴う表現型、ゲノム不安定性、そしてがんや老化関連モデルで研究される細胞形質転換過程と関係する。

RAP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTERF2IP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TERF2IP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TERF2IPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RAP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RAP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TERF2IP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RAP1の機能に不可欠なTERF2IPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TERF2IPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RAP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRAP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TERF2IP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RAP1 HDRプラスミド（h）および RAP1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTERF2IPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTERF2IP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。