Rap 1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400572

概要

RAP1AはRap1Aをコードしており、Rap1AはRasファミリーに属する小型GTPアーゼです。GDP結合型とGTP結合型の間を循環することで、インテグリンのインサイドアウト活性化、細胞接着、ならびに細胞骨格の再構築を制御します。RIAM、RapL、MAPKシグナル伝達の中間因子といったエフェクターを介して、Rap1Aはフォーカルアドヒージョンの動態、細胞極性、膜輸送を協調的に調節し、細胞移動やバリア機能に影響を及ぼします。Rap1Aの活性はGPCR経路および受容体型チロシンキナーゼ経路からの入力を統合し、内皮細胞間接着の制御や白血球接着の調節にも寄与します。RAP1Aシグナルの異常は、がんモデルにおける増殖能・浸潤能の変化や、接着依存的シグナル伝達が撹乱されることで生じる血管系および炎症性の表現型と関連づけられています。

Rap 1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRAP1A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RAP1A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RAP1Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rap 1Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rap 1Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RAP1A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rap 1Aの機能に不可欠なRAP1Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RAP1Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rap 1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRap 1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RAP1A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rap 1A HDRプラスミド（h）および Rap 1A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRAP1Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRAP1A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。