Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
RANKL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423448
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- RANKL O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico RANKL, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:RANKL Anticorpo (12A668): sc-52950
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
RANKL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423448 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene murino **Tnfsf11** codifica o **RANKL**, um ligante da superfamília do TNF expresso por células estromais da linhagem osteoblástica e por células imunes ativadas, que sinaliza por meio de seu receptor **RANK (TNFRSF11A)** para controlar a diferenciação, ativação e sobrevivência de osteoclastos. A interação **RANKL–RANK** ativa programas transcricionais dependentes de **NF-κB**, **MAPK** e **NFATc1**, centrais para a remodelação óssea, a organogênese de linfonodos e a comunicação cruzada entre células dendríticas e células T. Fisiologicamente, a atividade do RANKL é contrabalançada pela **osteoprotegerina (OPG/TNFRSF11B)** e contribui para o acoplamento entre a ativação imune e a renovação do esqueleto. A sinalização desregulada de RANKL está implicada na erosão óssea inflamatória, na perda óssea relacionada à osteoporose e nas interações osteolíticas entre tumor e osso, tornando-o um alvo-chave para estudos mecanísticos de osteoimunologia.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RANKL (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tnfsf11 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tnfsf11, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tnfsf11 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RANKL.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tnfsf11 para a investigação da sinalização de RANKL, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tnfsf11 críticos para a função RANKL
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tnfsf11 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo RANKL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo RANKL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tnfsf11. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo RANKL Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR RANKL (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tnfsf11 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tnfsf11 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.