RANKL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423448

概要

マウスのTnfsf11はRANKLをコードしており、RANKLは骨芽細胞系譜の間質細胞や活性化免疫細胞で発現するTNFスーパーファミリーのリガンドです。RANKLは受容体であるRANK（TNFRSF11A）を介してシグナルを伝達し、破骨細胞の分化、活性化、生存を制御します。RANKL–RANKの結合は、骨リモデリング、リンパ節の形成、樹状細胞とT細胞のクロストークに中心的なNF-κB、MAPK、NFATc1依存的な転写プログラムを駆動します。生理学的には、RANKL活性はオステオプロテゲリン（OPG/TNFRSF11B）によって拮抗され、免疫活性化と骨代謝回転の連関に寄与します。RANKLシグナルの破綻は、炎症性の骨びらん、骨粗鬆症に伴う骨量減少、溶骨性腫瘍と骨の相互作用に関与するとされ、骨免疫学（osteoimmunology）の機序研究における重要な標的となっています。

RANKL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTnfsf11遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tnfsf11内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tnfsf11のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RANKLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RANKLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tnfsf11欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RANKLの機能に不可欠なTnfsf11エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tnfsf11ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RANKL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRANKL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tnfsf11遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RANKL HDRプラスミド（m）および RANKL HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTnfsf11ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTnfsf11標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。