Ran BP-M Double Nickase Plasmid (h): sc-403548-NIC

RANBP9 kodiert Ran BP-M, ein Ran-bindendes Adapterprotein, das als Gerüst innerhalb von Multiproteinkomplexen fungiert und den nukleozytoplasmatischen Transport mit Signaltransduktion und Zytoskelettregulation verknüpft. Ran BP-M wurde damit in Verbindung gebracht, Protein-Protein-Interaktionen zu koordinieren, die die transkriptionelle Kontrolle, DNA-Schadensantworten und zellzyklusassoziierte Prozesse beeinflussen. Über diese Funktionen kann RANBP9 Signalwege modulieren, die für die Anpassung an zellulären Stress und die Proteostase relevant sind, und stellt damit einen nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung kontextabhängiger regulatorischer Netzwerke dar. Eine veränderte RANBP9-Expression oder eine veränderte Zusammensetzung seiner Komplexe wurde mit Phänotypen in der onkologischen und neurobiologischen Forschung in Zusammenhang gebracht, was die Untersuchung in krankheitsrelevanten Modellsystemen unterstützt.

Ran BP-M Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RANBP9-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RANBP9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RANBP9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RANBP9-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.