Ral BP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402752

概要

RALBP1は、Ral BP-1（RLIP76とも呼ばれる）をコードしており、低分子量GTPアーゼであるRalA/RalBの多機能エフェクターとして、小型GTPアーゼシグナル伝達をエンドサイトーシス、細胞骨格リモデリング、膜輸送に結び付けます。Ral BP-1は、クラスリン依存性の取り込みやアダプター複合体の構成要素と相互作用して受容体のターンオーバーや小胞ダイナミクスに影響を与える一方、グルタチオン抱合体および外来性（キセノバイオティック）代謝産物のATP依存的輸送を介してストレス応答ネットワークにも寄与します。これらの働きを通じて、RALBP1は細胞移動、細胞周期進行、酸化ストレスや求電子性ストレスに対する細胞抵抗性などの過程に影響を及ぼします。RALBP1の発現やシグナル伝達の破綻は複数のがんの文脈で報告されており、浸潤、転移関連経路、ならびに細胞のストレス耐性との関連で頻繁に研究されています。

Ral BP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRALBP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RALBP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RALBP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ral BP-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ral BP-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RALBP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ral BP-1の機能に不可欠なRALBP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RALBP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ral BP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRal BP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RALBP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ral BP-1 HDRプラスミド（h）および Ral BP-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRALBP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRALBP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。