Raf-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400202-LAC

Das humane RAF1-Gen kodiert Raf-1, eine Serin/Threonin-Kinase, die als zentraler Knotenpunkt des MAPK-Signalwegs fungiert und aktivierte GTPasen der RAS-Familie mit der MEK1/2- und ERK1/2-Signalisierung verbindet. Raf-1 integriert Signale von Rezeptor-Tyrosinkinasen und unterschiedlichen Scaffold-Proteinen, um Proliferation, Differenzierung, Überleben und Stressantworten zu regulieren, und übernimmt darüber hinaus Funktionen in der Zytoskelettdynamik sowie der mitochondrialen Signalübertragung. Eine fehlregulierte RAF1-Aktivität trägt zu der aberranten ERK-Signalstärke bei, die in verschiedenen krebsrelevanten Signalkontexten beobachtet wird, und ist zudem an RASopathie-Phänotypen beteiligt, und zwar durch Überaktivierung des Signalwegs und veränderte entwicklungsbezogene Signalgebung. Damit stellt RAF1 einen mechanistischen Einstiegspunkt dar, um Rückkopplungen im Signalweg, die Kontrolle von Signalstärke und -dauer sowie das Cross-Talk mit PI3K/AKT und apoptotischen Regulatoren zu untersuchen.

Raf-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente RAF1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Raf-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der RAF1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Raf-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen RAF1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.