Plásmido Doble Nickase (m) RACK1: sc-420608-NIC

Rack1 codifica el receptor de la proteína quinasa C activada 1 (RACK1), una proteína andamiaje conservada con repeticiones WD40 que organiza complejos de señalización multiproteicos y conecta las señales de los receptores con rutas de quinasas aguas abajo. En células de ratón, RACK1 se asocia con isoformas de PKC e integra la señalización a través de MAPK/ERK, quinasas de la familia Src y redes relacionadas con PI3K; además, actúa en la subunidad ribosomal 40S para modular el inicio de la traducción y la síntesis de proteínas dependiente de la respuesta al estrés. A través de estas funciones, RACK1 influye en la adhesión celular, la polaridad, la migración y la progresión del ciclo celular mediante la coordinación de vías de adhesión focal y de remodelación del citoesqueleto. La desregulación de la señalización y del control traduccional dependientes de RACK1 se ha asociado con estados de señalización oncogénica, circuitos de señalización inflamatoria y respuestas alteradas al estrés celular, lo que la convierte en un objetivo frecuente de estudios mecanísticos.

RACK1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Rack1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Rack1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Rack1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Rack1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.