Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RACK1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-420608-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- RACK1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- RACK1ダブルニカースプラスミド（m）およびRACK1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Rack1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: RACK1 抗体 (B-3): sc-17754
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
RACK1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-420608-NIC | 20 µg | $410.00 |
Rack1 は、活性化 C キナーゼ受容体 1（RACK1）をコードしており、複数のタンパク質からなるシグナル伝達複合体を組織化し、受容体からの入力を下流のキナーゼ経路へと結び付ける、保存性の高い WD40 リピート型の足場タンパク質である。マウス細胞では、RACK1 は PKC の各アイソフォームと会合し、MAPK/ERK、Src ファミリーキナーゼ、PI3K 関連ネットワークを介したシグナル伝達を統合する。また、40S リボソームサブユニット上でも機能し、翻訳開始やストレス応答性のタンパク質合成を調節する。これらの役割を通じて RACK1 は、焦点接着および細胞骨格リモデリング経路の協調により、細胞接着、極性、遊走、ならびに細胞周期進行に影響を及ぼす。RACK1 依存的なシグナル伝達や翻訳制御の破綻は、がん原性シグナル状態、炎症性シグナル回路、細胞ストレスへの応答変化と関連付けられており、機構解明研究の標的としてしばしば取り上げられる。
RACK1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Rack1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Rack1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Rack1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Rack1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。