Plásmido CRISPR de Activación (h) Rac 2: sc-401157-ACT

RAC2 codifica Rac2, una pequeña GTPasa de la familia Rho enriquecida en células hematopoyéticas que alterna entre estados unidos a GDP y a GTP para coordinar la remodelación del citoesqueleto de actina, la polaridad celular y el tráfico de membranas. Rac2 actúa aguas abajo de la señalización de inmunorreceptores, integrinas y quimiocinas para regular la activación de la NADPH oxidasa, la producción de especies reactivas de oxígeno y las respuestas antimicrobianas de los fagocitos, además de influir en las salidas de señalización dependientes de MAPK y PI3K. En leucocitos, Rac2 favorece la quimiotaxis, la adhesión, la desgranulación y la dinámica de la sinapsis inmunológica, conectando el control del citoesqueleto con vías inflamatorias y de inmunidad innata. La actividad o expresión desregulada de RAC2 se ha asociado con alteraciones en la defensa del huésped y la homeostasis inmunitaria, por lo que es relevante para estudiar mecanismos de inmunodeficiencia, fenotipos inflamatorios y señalización en células hematológicas.

Rac 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rac 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rac 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rac 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rac 2 en células tumorales con expresión de RAC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.