Rac 1 Lentiviral Activation Particles (m2): sc-422573-LAC-2

Das murine Rac1-Gen kodiert die kleine GTPase Rac1, einen zentralen Regulator der Aktinzytoskelett-Dynamik, der durch den Wechsel zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen die Bildung von Lamellipodien, Zellmigration, Adhäsion und Polarität steuert. Die Rac1-Signalgebung integriert Signale von Rezeptor-Tyrosinkinasen und GPCRs, um Signalwege wie PI3K–AKT, PAK–MAPK und die NADPH-Oxidase-abhängige Bildung reaktiver Sauerstoffspezies zu koordinieren und so Proliferation, Überleben und Funktionen der angeborenen Immunität zu prägen. Eine fehlregulierte Rac1-Aktivität ist mit abweichender Gewebemorphogenese, entzündlichen Reaktionen und onkogenen Signalprogrammen verknüpft, was Rac1 zu einem wichtigen Knotenpunkt in Studien zur Tumorzellinvasion, zur Gefäßbiologie und zur Neuroentwicklung macht. Das Gene Editing von murinem Rac1 ermöglicht die mechanistische Aufklärung von Rho-GTPase-Netzwerken in vivo und in kultivierten Zellen und unterstützt Assays zur Umgestaltung des Zytoskeletts, zur Signaltransduktion und zu Zellzustandsübergängen.

Rac 1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Rac1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Rac 1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Rac1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Rac 1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Rac1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.