rabphilin-3A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404628

Panoramica

RPH3A codifica la rabphilin-3A, un effettore di Rab3A/Rab27 arricchito nei neuroni che collega la segnalazione Ca²⁺-dipendente all’esocitosi regolata delle vescicole. Attraverso interazioni con piccole GTPasi e componenti delle vescicole sinaptiche, la rabphilin-3A contribuisce all’attracco (docking), al priming e alla probabilità di rilascio delle vescicole, supportando un’efficiente secrezione di neurotrasmettitori. La sua attività si interseca con le vie presinaptiche di traffico di membrana e con la dinamica del citoscheletro che coordinano il riciclo delle vescicole e la plasticità sinaptica. La disregolazione del trasporto delle vescicole sinaptiche e dei macchinari di rilascio che coinvolgono RPH3A è rilevante per studi meccanicistici sulla biologia delle malattie neurologiche e neuropsichiatriche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO rabphilin-3A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RPH3A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RPH3A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RPH3A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina rabphilin-3A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RPH3A per lo studio della segnalazione di rabphilin-3A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RPH3A critici per la funzione di rabphilin-3A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RPH3A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal rabphilin-3A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal rabphilin-3A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RPH3A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal rabphilin-3A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR rabphilin-3A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RPH3A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RPH3A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.