Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab 9B: sc-412147-ACT

RAB9B codifica la pequeña GTPasa Rab 9B, un miembro de la familia RAB que coordina la dinámica del tráfico vesicular mediante un ciclo regulado de GDP/GTP. Rab 9B participa en el transporte desde endosomas tardíos hacia la red trans del Golgi y en la maduración endosomal, procesos que influyen en la entrega a los lisosomas, el recambio de receptores de membrana y la homeostasis general del sistema endomembranoso. Al moldear la clasificación intracelular y el tráfico retrógrado, la actividad de RAB9B puede modular la salida de señales y la función de los orgánulos en tipos celulares con un alto flujo de membrana. La desregulación de las vías de tráfico endolisosomal es ampliamente relevante para estudios de neurodegeneración, biología de infecciones y adaptación de células cancerosas, lo que convierte a RAB9B en un nodo útil para la investigación mecanística.

Rab 9B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB9B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 9B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB9B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB9B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 9B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB9B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 9B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 9B en células tumorales con expresión de RAB9B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.