Rab 9A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416915-ACT

RAB9Aは、後期エンドソームのダイナミクスおよび後期エンドソームからトランスゴルジネットワーク（TGN）への逆行性輸送を制御する小型GTPアーゼであるRab9Aをコードします。Rab9Aは、小胞の出芽、輸送、膜融合を協調的に調節することで、エンドソームでのソーティング、リソソームの恒常性維持、ならびにマンノース-6-リン酸受容体などのカーゴのリサイクルを支えます。この輸送軸は、オートファジー‐リソソーム経路や、細胞のプロテオスタシスとシグナル伝達を形作るより広範な膜輸送ネットワークと交差しています。エンドソーム輸送の破綻やRab GTPアーゼ活性の異常は、神経変性、病原体の細胞内輸送、がん細胞生物学に関連する機構と結び付けられており、RAB9Aは機構解明研究に有用なノードとなります。

Rab 9A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB9Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 9A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB9A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB9A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 9Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB9A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 9A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB9A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 9A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。