Rab 5A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-435445

概要

Rab5aは小型GTPアーゼであるRab 5Aをコードしており、初期エンドソーム動態の中枢的な制御因子として、クラスリン介在性エンドサイトーシス、小胞のドッキング／融合、エンドソーム成熟を、EEA1やPI3Kシグナル伝達ノードなどのエフェクターを介して統合的に制御します。受容体の内在化と輸送を制御することで、Rab 5AはEGFR/MAPKやPI3K/AKTを含む経路の下流シグナルの強度と持続時間に影響を与え、さらに膜リサイクリングや、リソソーム分解へ向かうカーゴの仕分けにも関与します。Rab 5Aの活性は、エンドソームとアクチンのクロストークを介した細胞骨格リモデリングや神経突起伸長とも関連しています。Rab5aが関与するエンドサイトーシス輸送の破綻は、神経変性に関連したエンドソーム異常、免疫受容体の取り扱いの変化、ならびに増殖性疾患モデルにおける増殖因子受容体シグナルの異常などに関与することが示唆されています。

Rab 5A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRab5a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rab5a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rab5aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rab 5Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rab 5Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rab5a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rab 5Aの機能に不可欠なRab5aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rab5aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rab 5A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRab 5A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rab5a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rab 5A HDRプラスミド（m）および Rab 5A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRab5aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRab5a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。