Particules Lentivirales d'Activation (h) Rab 4A: sc-401828-LAC

RAB4A code Rab 4A, une petite GTPase qui régule la dynamique des endosomes précoces et le recyclage rapide des protéines membranaires internalisées vers la membrane plasmique. En coordonnant le bourgeonnement, la mobilité et la fusion des vésicules via des interactions avec des protéines effectrices, Rab 4A influence le trafic des récepteurs, l’absorption des nutriments et l’atténuation des signaux dans des voies telles que le recyclage des récepteurs aux facteurs de croissance et le renouvellement des intégrines. Une activité altérée de RAB4A a été associée à un tri endocytique dysrégulé, à des modifications de la migration cellulaire et au remodelage des sorties de signalisation dans le cancer ainsi que dans d’autres contextes prolifératifs ou neurodégénératifs. Par conséquent, RAB4A est fréquemment étudié pour comprendre comment le transport endosomal contrôle la disponibilité des récepteurs à la surface cellulaire, la signalisation des kinases en aval et l’identité des compartiments membranaires.

Les particules d'activation lentivirales Rab 4A (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de RAB4A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Rab 4A (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription RAB4A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Rab 4A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif RAB4A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.