Rab 44 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-418677-LAC

RAB44 codifica Rab 44, uma pequena GTPase atípica da família Rab implicada na regulação do tráfego intracelular de membranas, na maturação de vesículas e na dinâmica endolisossomal. Como proteína “interruptora” que alterna entre estados ligados a GTP e a GDP, acredita-se que Rab 44 influencie a identidade dos compartimentos e o direcionamento de cargas que convergem com vias secretoras e degradativas, incluindo processos associados à função de células imunes e à sinalização inflamatória. A atividade desregulada de GTPases Rab pode perturbar a renovação de receptores, o processamento de antígenos e a transdução de sinal, tornando RAB44 um alvo relevante para estudos de reprogramação de vias em contextos de câncer e de doenças associadas ao sistema imune. A investigação funcional de RAB44 sustenta análises mecanísticas que conectam o controle do tráfego ao estado de ativação celular, a respostas ao estresse e à proteostase.

As Partículas de Ativação Lentivirais Rab 44 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de RAB44 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Rab 44 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição RAB44, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Rab 44. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo RAB44 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.