Rab 44 Lentiviral Activation Particles (h): sc-418677-LAC

RAB44 kodiert Rab44, eine atypische kleine GTPase der Rab-Familie, die an der Regulation des intrazellulären Membrantransports, der Vesikelreifung und der endolysosomalen Dynamik beteiligt ist. Als Schalterprotein, das zwischen GTP- und GDP-gebundenen Zuständen wechselt, beeinflusst Rab44 vermutlich die Identität zellulärer Kompartimente und die Sortierung von Fracht, die Schnittstellen zu sekretorischen und degradativen Wegen aufweisen – einschließlich Prozessen, die mit der Funktion von Immunzellen und inflammatorischer Signalgebung gekoppelt sind. Eine fehlregulierte Rab-GTPase-Aktivität kann den Rezeptorumsatz, die Antigenprozessierung und die Signaltransduktion stören, wodurch RAB44 ein relevantes Ziel für Studien zur Umprogrammierung von Signalwegen in Krebs sowie in immunassoziierten Erkrankungskontexten ist. Die funktionelle Untersuchung von RAB44 unterstützt mechanistische Analysen, die die Kontrolle des Traffickings mit zellulären Aktivierungszuständen, Stressantworten und der Proteostase verknüpfen.

Rab 44 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente RAB44-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Rab 44 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der RAB44-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Rab 44-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen RAB44-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.