Rab 34 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406606

概要

RAB34はRabファミリーに属する低分子GTPアーゼであるRab34をコードしており、細胞内膜輸送の制御に関与します。これまでに、ゴルジ体およびエンドソームの動態、リソソームの局在制御、ならびにファゴソーム成熟における役割が報告されています。Rab34はGTP結合型とGDP結合型の間を循環することで、小胞輸送、オルガネラの係留、カーゴの選別を協調的に調節し、受容体のターンオーバーやシグナル出力に影響を及ぼします。Rabを介した輸送の破綻は、オートファジー―リソソーム機能や膜恒常性を乱し得ますが、これらの過程はがん細胞の性質、神経変性、宿主―病原体相互作用の研究でしばしば検討されます。そのためRAB34は、小胞輸送経路とそれが細胞生理に与える影響を解析するうえで有用な標的（ノード）となります。

Rab 34 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRAB34遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RAB34内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RAB34のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rab 34タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rab 34シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RAB34欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rab 34の機能に不可欠なRAB34エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RAB34ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rab 34 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRab 34 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RAB34遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rab 34 HDRプラスミド（h）および Rab 34 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRAB34ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRAB34標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。