Rab 33B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404070

概要

RAB33B は小型GTPアーゼである Rab33B をコードしており、ゴルジ体―小胞体（ER）インターフェースにおける膜輸送イベントを協調的に制御する Rab ファミリーの一員です。Rab33B は小胞形成、カーゴの選別、ゴルジ体の恒常性を制御し、オルガネラ動態に影響するオートファジー関連の輸送過程にも関与することが示唆されています。これらの役割を通じて、分泌経路の組織化と細胞内輸送の忠実性に寄与しており、これらの過程は神経発達性および神経変性の表現型でしばしば障害されます。RAB33B 機能の変化は、症候群性の骨格・発達障害と関連づけられており、輸送依存的な細胞恒常性を研究する上での重要性を支持しています。

Rab 33B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRAB33B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RAB33B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RAB33Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rab 33Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rab 33Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RAB33B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rab 33Bの機能に不可欠なRAB33Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RAB33Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rab 33B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRab 33B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RAB33B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rab 33B HDRプラスミド（h）および Rab 33B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRAB33Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRAB33B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。