Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Rab 27a Plasmide Double Nickase (m): sc-419219-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rab 27a Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rab 27a Double Nickase Plasmid (m) e il Rab 27a Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Rab27a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rab 27a Antibody (E-8): sc-74586
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rab 27a Plasmide Double Nickase (m) | sc-419219-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab 27a Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419219-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Rab27a codifica la piccola GTPasi Rab27a, un regolatore del traffico di membrana che controlla l’ancoraggio e la fusione delle vescicole secretorie con la membrana plasmatica. Nelle cellule murine, Rab27a coordina l’esocitosi regolata attraverso interazioni con effettori quali melanofilina, le proteine Slp/Exophilin e Munc13-4, sostenendo processi che includono il trasporto dei melanosomi, il rilascio dei granuli citotossici e la secrezione dei granuli densi piastrinici. Questa via si interseca con il trasporto vescicolare dipendente dall’actina, la biogenesi degli organelli correlati ai lisosomi e la funzione della sinapsi immunologica. Un’attività di Rab27a deregolata è stata associata a fenotipi di pigmentazione e a disfunzioni immunitarie in modelli genetici, rendendola un nodo utile per studiare la dinamica delle vescicole e l’omeostasi degli organelli.
Rab 27a Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Rab27a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Rab27a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Rab27a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Rab27a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.