Plasmide Double Nickase (m) Rab 14: sc-427035-NIC

Rab14 murin code la petite GTPase Rab14, un membre de la superfamille RAS qui coordonne le trafic membranaire intracellulaire en alternant entre des états liés au GDP et au GTP. Rab14 régule le recyclage endocytique et le transport biosynthétique entre l’appareil de Golgi, les endosomes et la membrane plasmique, influençant le tri des cargos, le renouvellement des récepteurs et la maturation des vésicules via des interactions avec des effecteurs et la machinerie SNARE. Ces processus recoupent la signalisation, l’absorption des nutriments et l’organisation du cytosquelette, faisant de Rab14 un nœud utile pour étudier les perturbations de la dynamique membranaire. Une dérégulation du trafic dépendant de Rab14 a été associée dans la littérature à des modifications de la migration cellulaire et de l’homéostasie métabolique, et elle est fréquemment étudiée dans des modèles de troubles prolifératifs et neurobiologiques où le transport vésiculaire contribue au phénotype.

Rab 14 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Rab14 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Rab14. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Rab14. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Rab14.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.