Rab 14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427035

概要

Rab14は、小型GTPアーゼであるRab14をコードしており、エンドソーム、ゴルジ体、細胞膜の間の小胞輸送を制御して、カーゴの仕分けと膜リサイクリングを協調的に調節します。Rab14は、受容体の利用可能性、栄養トランスポーターの局在、膜動態を形成するエンドサイトーシスリサイクリングおよび分泌輸送過程に関与します。エンドソーム成熟や輸送ノードの編成における役割を通じて、Rab14は細胞極性、細胞質分裂、代謝制御に関連する経路に影響を及ぼします。Rab14依存的な輸送の破綻は、実験系において、がん化シグナル伝達、インスリン応答性輸送、病原体含有液胞のリモデリングに関連する表現型と結び付けられています。

Rab 14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRab14遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rab14内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rab14のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rab 14タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rab 14シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rab14欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rab 14の機能に不可欠なRab14エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rab14ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rab 14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRab 14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rab14遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rab 14 HDRプラスミド（m）および Rab 14 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRab14ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRab14標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。