Plásmido CRISPR de Activación (m) R2: sc-422758-ACT

El gen murino **Rrm2** codifica la subunidad R2 de la ribonucleótido reductasa, que cataliza la síntesis *de novo* de desoxirribonucleótidos necesaria para la replicación y la reparación del ADN. R2 aporta un cofactor generador de radicales que, junto con la subunidad grande, mantiene reservas equilibradas de dNTP que sostienen la progresión de la fase S, la estabilidad de la horquilla de replicación y el mantenimiento del genoma. La expresión de **Rrm2** está estrechamente acoplada al control del ciclo celular y se vincula funcionalmente a las vías de respuesta al daño del ADN y al estrés replicativo. La actividad desregulada de **RRM2** se ha asociado con fenotipos proliferativos e inestabilidad genómica, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar el metabolismo de nucleótidos en biología relevante para el cáncer y otros contextos de alta renovación celular.

R2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Rrm2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

R2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Rrm2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Rrm2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de R2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Rrm2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de R2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía R2 en células tumorales con expresión de Rrm2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.