R-Spondin2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-433683

概要

Rspo2 は、分泌性のマトリセルラーリガンドである R-Spondin2 をコードしており、LGR 受容体に結合し、RNF43/ZNRF3 による Frizzled 受容体のターンオーバーを抑制することで、カノニカルな WNT/β-カテニンシグナルを増強します。マウス組織では、R-Spondin2 は発生パターニング、幹／前駆細胞の維持、上皮－間葉間シグナル伝達に寄与し、器官形成、組織リモデリング、再生などの過程に影響を与えます。その活性は、WNT によって駆動される転写プログラムや、細胞外マトリックス依存的なモルフォゲン勾配などを含む、増殖と分化を制御する経路と交差します。RSPO2–WNT シグナルの破綻は、発生異常モデルやがん化経路の活性化モデルなど、異常な組織増殖や分化の文脈で頻繁に研究されています。

R-Spondin2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRspo2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rspo2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rspo2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、R-Spondin2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、R-Spondin2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rspo2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• R-Spondin2の機能に不可欠なRspo2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rspo2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• R-Spondin2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびR-Spondin2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rspo2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  R-Spondin2 HDRプラスミド（m）および R-Spondin2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRspo2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRspo2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。