Pygopus 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405936

概要

PYGO1は、カノニカルWntシグナル伝達においてβ-カテニン/TCF転写複合体をクロマチンへ結び付ける核内共活性化因子であるPygopus 1をコードします。Pygopus 1はBCL9/9Lやヒストン修飾機構との相互作用を介して、細胞運命決定、増殖、上皮恒常性を制御する転写プログラムを支えます。PYGO1依存的なWnt出力は、幹細胞様性の維持や分化といったプロセスとも交差しており、この経路の制御異常は腫瘍性の転写状態や発生の破綻にしばしば関与します。これらの特徴により、PYGO1はヒト細胞モデルにおけるWnt駆動性の遺伝子発現とクロマチンへの関与を解明するための有用な標的となります。

Pygopus 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPYGO1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PYGO1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PYGO1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Pygopus 1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Pygopus 1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PYGO1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Pygopus 1の機能に不可欠なPYGO1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PYGO1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Pygopus 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPygopus 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PYGO1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Pygopus 1 HDRプラスミド（h）および Pygopus 1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPYGO1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPYGO1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。