Plásmido CRISPR de Activación (h) Purα: sc-403760-ACT

PURA codifica Purα, una proteína de unión específica de secuencia a ADN y ARN monocatenarios que coordina la regulación transcripcional, la replicación del ADN y el transporte/traducción de ARNm. Purα participa en el control del ciclo celular y el mantenimiento del genoma, y está enriquecida en contextos neuronales, donde influye en la dinámica de los gránulos de ARN y la función sináptica. La desregulación de PURA se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con una excitabilidad neuronal alterada, y el metabolismo del ARN dependiente de Purα vincula este factor con vías más amplias que gobiernan la síntesis de proteínas y las respuestas al estrés. Estas propiedades hacen de PURA una diana útil para estudiar programas de expresión génica e interacciones ARN-proteína relevantes para la biología del sistema nervioso.

Purα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PURA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Purα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PURA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PURA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Purα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PURA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Purα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Purα en células tumorales con expresión de PURA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.