PTRF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404669

概要

CAVIN1は、カベオラの中核的な構造要素であるポリメラーゼIおよび転写産物放出因子（PTRF／cavin-1）をコードしています。PTRFはカベオリンと協調して、フラスコ状の細胞膜陥入構造を安定化します。PTRFはカベオラの生合成と動態を支え、脂質恒常性、エンドサイトーシス、機械的保護に寄与するとともに、細胞表面で組織化されるシグナル伝達経路にも影響を与えます。膜の構造化とトラフィッキングにおける役割を通じて、PTRFは受容体の利用可能性や、機械的・代謝的刺激に対する下流のシグナル応答を調節し得ます。CAVIN1／PTRFの機能不全は、筋・脂肪組織におけるカベオラ機能の変化と関連づけられており、リポジストロフィー関連の表現型や腫瘍細胞の挙動などの文脈で研究されています。

PTRF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCAVIN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CAVIN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CAVIN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PTRFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PTRFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CAVIN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PTRFの機能に不可欠なCAVIN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CAVIN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PTRF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPTRF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CAVIN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PTRF HDRプラスミド（h）および PTRF HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCAVIN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCAVIN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。