Plásmido CRISPR de Activación (h) PTPN21: sc-407466-ACT

PTPN21 codifica una fosfatasa de tirosina proteica no receptora que modula la señalización dependiente de la fosforilación y las interacciones proteína–proteína en múltiples contextos celulares. Se ha relacionado con la regulación del tráfico de receptores y de la señalización de quinasas aguas abajo, incluidas interacciones con la maquinaria del citoesqueleto y endocítica que influyen en la adhesión celular, la migración y el crecimiento de neuritas. A través de estas funciones, PTPN21 puede moldear las salidas de vías como MAPK/ERK y otras redes impulsadas por fosfotirosinas que coordinan programas de crecimiento y diferenciación. La actividad fosfatasa desregulada y los cambios en la expresión de PTPN21 se han asociado con fenotipos relacionados con el cáncer y con procesos relevantes para la neurobiología, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudios de señalización en células humanas.

PTPN21 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTPN21 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PTPN21 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTPN21 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTPN21, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PTPN21. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTPN21 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PTPN21 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PTPN21 en células tumorales con expresión de PTPN21 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.