Plasmide CRISPR d'Activation (h) PTPμ: sc-403126-ACT

PTPRM code la protéine tyrosine phosphatase de type récepteur mu (PTPμ), une phosphatase transmembranaire à passage unique qui assure une adhésion homophilique cellule–cellule et relie les contacts extracellulaires à la déphosphorylation intracellulaire des tyrosines. En régulant les complexes cadhérine–caténine et des substrats jonctionnels, PTPμ influence la fonction de barrière des épithéliums et des endothéliums, la migration cellulaire et l’organisation du cytosquelette. L’activité de PTPRM s’articule avec la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase et avec des voies en aval telles que MAPK et PI3K/AKT, en ajustant des seuils de signalisation dépendants de la phosphorylation. Des altérations de l’expression de PTPRM ou du contrôle de sa phosphorylation ont été associées à une adhésion dérégulée et à des phénotypes invasifs dans plusieurs contextes pertinents sur le plan pathologique, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de l’organisation tissulaire et de l’équilibre des signaux.

PTPμ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTPRM sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PTPμ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTPRM dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTPRM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PTPμ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTPRM natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PTPμ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PTPμ dans les cellules tumorales présentant une expression de PTPRM silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.