PTPε CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405606

概要

PTPREは、プロテインチロシンホスファターゼ・イプシロン（PTPε）をコードしている。PTPεは受容体型および細胞質型のホスファターゼで、主要なキナーゼ基質上のホスホチロシン残基を脱リン酸化することでシグナル伝達を調節する。PTPεはMAPK経路およびJAK/STAT経路の出力制御に関与し、受容体型チロシンキナーゼやSrcファミリーキナーゼのシグナルを微調整することで、細胞増殖、接着、遊走、ならびに免疫細胞の活性化閾値に影響を及ぼす。リン酸化依存的なシグナル伝達ネットワークを形成・調整する役割から、PTPεは、成長因子シグナルの破綻、炎症性シグナル、がん化に伴う経路再配線といった文脈で研究されている。アイソフォーム特異的な局在と活性を持つことから、PTPREは細胞内区画化されたホスファターゼ制御によるシグナル伝達の解析に有用なノードである。

PTPε CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPTPRE遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PTPRE内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PTPREのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PTPεタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PTPεシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PTPRE欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PTPεの機能に不可欠なPTPREエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PTPREゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PTPε CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPTPε CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PTPRE遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PTPε HDRプラスミド（h）および PTPε HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPTPREホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPTPRE標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。